Discussion
1.PAR-4活性化によるNO生成
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- Ca2+濃度の上昇には関与しない*1(←血管内皮細胞中ではGi/oタンパクが関与している)
- BAPTA混合により耐性を示すようになる
- pertussis toxinにより阻害される
2ionomycinによってひきおこされたCa2+濃度の上昇及びNO生成
BAPTAを細胞に加えると[Ca2+]上昇、NO生成は阻害された(ionomycinが1μMの場合)
↑
↓
BAPTAを細胞に加えても何も変化がなかった(ionomycinが10μMの場合)
⇒10μMのionomycinによって起こった[Ca2+]の上昇は大きすぎて細胞内のBAPTAによってキレート化できない。
※ionomycinは体内では10μMにはなり得ない*2ので不適切
3.PAR-4AM,AYPGKF-NH2,thrombinによって引き起こされたNO生成
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- [Ca2+]上昇には関係ない
- BAPTAを細胞に加えても阻害には起こらない
4.BAECsにおけるPAR-1AM,AYPGKF-NH2によるNO生成量
わずかだった
3&4⇒thrombinによるNO生成のほとんどはBAECs中のPAR-4が仲介していてPAR-1はほとんど関与していない
5.PAR-1の活性化はPAR-4の活性化とは対照的にCa2+シグナル,NO生成と関連性がある
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- PAR-1の活性化：Ca2+が関与するNO生成も、関与しないNO生成も活性化する
- PAR-4の活性化：Ca2+が関与しないmechanismのほうを活性化する
6.pertussis toxinの実験(Fig.4)
PAR-4を活性化することでGi/oタンパクがCa2+の関与しないNO生成を仲介する*3
